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BSA的作用及制備方法的可研報告(資金申請)

網(wǎng)址:m.rioce.com 來源:資金申請報告范文發(fā)布時間:2019-05-07 14:41:40

第一節(jié) BSA的定義

牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的一種白蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7。(可研報告)

第二節(jié) BSA的作用

1.BSA是酶的穩(wěn)定劑,防止酶的分解和非特異性吸附;

2.BSA能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱,表面張力及化學(xué)因素引起的變性的至于作用機(jī)理我不是很清楚,可能是因為它結(jié)構(gòu)中有17個二硫鍵,和一個巰基,巰基的化學(xué)反應(yīng)很活潑,二硫鍵有抗氧化還原的作用,因此可與多種陽離子,陰離子和小分子結(jié)合;

3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。

BSA一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應(yīng)液中,因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入BSA后,它可能起到“保護(hù)”或“載體”作用,不少酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什么影響。對多數(shù)底物DNA而言,BSA可以使酶切更完全,并可實現(xiàn)重復(fù)切割。在37℃,酶切反應(yīng)超過1h時,BSA可以使酶更加穩(wěn)定,因為在不含BSA的反應(yīng)緩沖液中,許多限制性內(nèi)切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結(jié)合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內(nèi)切酶活性的金屬離子和其它化學(xué)物質(zhì)。

第三節(jié) BSA的制備方法

牛血清白蛋白Albumin from bovine serum,BSA,又稱為 組分V,或Cohn V,名稱起源于BSA最早的分餾法Cohn 冷乙醇法,Cohn法仍然是目前非常普遍的BSA分餾法,除了了冷乙醇法,目前最主要的還有熱休克法和色譜層析法。

一、Cohn 冷乙醇法

Cohn 冷乙醇法最早是由哈佛大學(xué)Edwin Cohn教授于1946年發(fā)明的,基于戰(zhàn)爭創(chuàng)傷治療對注射級別的蛋白的大規(guī)模需求,Cohn教授在較低的溫度下改變血漿的乙醇濃度和PH值,使其所含蛋白在不同的乙醇濃度下析出,在第五個析出的組分中主要成分即為BSA,所以BSA又稱組分V或Cohn V。

Cohn 法是最早的BSA分餾法,為后續(xù)的BSA分餾提供了重要的思路,但是Cohn法過程中血漿蛋白涉及乙醇和低PH酸變性,以及多種雜蛋白干擾,所以分餾的BSA的質(zhì)量上差強(qiáng)人意,相比其他更先進(jìn)的分餾法,存在許多問題:

BSA蛋白變性,片段化,活性低;

BSA純度較低,雜質(zhì)含量高;

BSA產(chǎn)量低;

適用一般實驗,很難用于細(xì)胞培養(yǎng)。

二、熱休克法

Cohn 法為大規(guī)模生產(chǎn)BSA提供了思路,但是因為涉及臨床使用,生產(chǎn)的BSA需要進(jìn)行肝炎病毒滅活,血漿在9%乙醇和PH6.5的時候加熱至68度;熱休克法一般需要添加辛酸最大程度維持BSA不被變性。

熱休克法生產(chǎn)的BSA產(chǎn)量最高,純度也高,逐漸取代Cohn法成為BSA分餾主要方法,但是熱休克法BSA也有一些缺陷:

BSA蛋白高溫變性,活性低;

辛酸對細(xì)胞有損傷,不適合細(xì)胞培養(yǎng);

純度低,加熱會產(chǎn)生很多變性BSA多聚體和一些片段化BSA,同時也會產(chǎn)生很多其他變性蛋白。

三、色譜層析法

色譜層析法Chromatographic法是目前BSA生產(chǎn)最為先進(jìn)的方法,也是最為溫和的方法;起于生產(chǎn)人血清白蛋白用于臨床治療,主要包括三個步驟,超濾,離子交換色譜層析和硫酸銨沉淀;整個過程,無加熱,無乙醇,無辛酸,最溫和的方法,最大程度保護(hù)BSA自然結(jié)構(gòu)和功能,生產(chǎn)的BSA結(jié)構(gòu)完整單體,絕不變性,活力最強(qiáng),純度最高,無雜質(zhì),最適合細(xì)胞培養(yǎng),MP位于世界上最為純凈的血源地-新西蘭,生產(chǎn)BSA超過15年歷史,用于胚胎移植,大批量生產(chǎn)BSA。


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